LabEx Luminex平台助力胶质瘤的肿瘤微环境研究

本周为大家带来的文献为发表于J Transl Med. (IF: 7.4)的” SIRPB1 regulates inflammatory factor expression in the glioma microenvironment via SYK: functional and bioinformatics insights”。本文使用了LabEx提供的Luminex检测服务。

 

SIRPB1在多种肿瘤中表达上调，包括胶质瘤，并且已知其促进肿瘤进展。然而其在胶质瘤免疫微环境中的功能仍不清楚。研究者分析了来自GTEx数据库的1152个正常样本和TCGA数据库的670个胶质瘤样本，探讨了SIRPB1表达与临床病理特征之间的关系。使用CRISPR/Cas9构建了SIRPB1基因敲除的THP-1细胞系，并在体外诱导巨噬细胞与胶质瘤细胞共培养，以了解SIRPB1在胶质瘤免疫微环境中的作用。最后，建立了一个预后模型来预测SIRPB1对预后的影响。发现胶质瘤中SIRPB1表达显著增高，这对免疫微环境产生不利影响，并与患者生存期呈负相关。SIRPB1激活后会导致SYK磷酸化，进而激活钙、MAPK和NF-κB信号通路，这一现象主要在髓系来源的细胞中观察到，而非胶质瘤细胞。体外共培养表明，SIRPB1敲除的巨噬细胞表现出降低的IL1RA、CCL2和IL-8水平，这些在SIRPB1异位表达后恢复，但在用SYK抑制剂GS9973处理后又减少。增加的SIRPB1表达与较低的总生存率相关。利用SIRPB1表达和其他临床病理变量，我们建立了一个高度预测准确性的诺模图。研究表明，巨噬细胞可以通过SIRPB1激活胶质瘤细胞，从而重新编程TME（肿瘤微环境），这表明SIRPB1可能是胶质瘤的一个有希望的治疗靶点。该研究旨在详细分析SIRPB1在胶质瘤免疫微环境中的作用，确定其激活及相关通路、促进肿瘤的细胞因子释放以及其在预后中的角色。通过使用来自TCGA和GTEx数据库的RNA测序和临床信息，研究者将肿瘤样本分为高SIRPB1表达和低SIRPB1表达两组。差异基因表达(DEGs)分析、富集分析、基因集富集分析(GSEA)、免疫浸润分析和免疫排斥常数(ICR)分析等方法被用于评估SIRPB1在不同肿瘤类型中的表达及其与免疫细胞类型的关联。此外，还进行了蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)分析、单细胞数据分析和伪时间分析，以探索IL1RN在微胶质细胞和巨噬细胞中的表达。统计分析和生存分析也得到了执行。最后，通过整合SIRPB1表达和关键的临床病理变量，构建了一个基于多变量COX回归的诺莫图，以预测患者的生存情况。总之，该研究为进一步探索SIRPB1作为潜在治疗靶点提供了基础。

 

 

LabEx提供的Luminex检测服务：

48 小时后，收集两层的培养基，用 0.45 μm 过滤器过滤，并在 - 80 ℃ 下保存。Luminex 检测由 Labex提供，结果中，培养基显示上腔（U87MG）中VEGF、PDGF-BB、IL-8和G-CSF水平升高，下腔（巨噬细胞）中CCL2、IL1B和CCL5水平升高。SIRPB1KO的炎症因子低于 SIRPB1WT（图B）。具体而言，SIRPB1KO组的IL-8 和 IL1RA水平明显较低（图C）。

  

   

胶质瘤-巨噬细胞共培养中的 SIRPB1。B、C 通过 Luminex 检测炎性细胞因子

 

 

重要发现：

• 信号调控蛋白（SIRPs）包括三个主要亚型： SIRPα、SIRPβ和SIRPγ，其中SIRPβ通过AKT通路参与肿瘤生长。
• SIRPB1 在胶质瘤的肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）中的表达表明它在肿瘤免疫反应调节中可能发挥作用。
• 胶质母细胞瘤微环境介质（包括趋化因子和细胞因子）与 SIRPB1 有关，表明其参与了免疫相关途径。
• SIRPB1 基因缺失会影响巨噬细胞中 TNFα 和 IL10 的水平，这表明它在巨噬细胞功能中发挥着微妙的作用。
• 对SIRPB1与CCL2、IL-8和IL1RA等关键介质的关联进行的研究突出表明，SIRPB1参与了胶质瘤的进展。
• SIRPB1 对 JAK/STAT 和 ERK 等信号通路的影响表明它有可能成为治疗靶点。
• 高水平的 SIRPB1 与脑胶质瘤的不良预后和关键临床指标相关，强调了其临床意义。
• 要全面了解 SIRPB1 在胶质瘤中的作用及其作为治疗靶点的潜力，还需要进一步的研究，包括体内研究和治疗靶点。