凋亡实验Annexin V染色为何不推荐用胰酶消化细胞

常用的消化酶一览

    

按照酶解能力做排序 

  

 问题：

含EDTA胰酶经常用来消化贴壁细胞，

但是在凋亡Annexin V染色中，

为何推荐尽量避免使用胰酶呢？

   

1. EDTA离子螯合剂影响染色

  

• Binding Buffer中含钙离子，由于Annexin V和磷脂酰丝酸结合时需要钙离子，所以Binding Buffer有利于Annexin V和磷脂酰丝氨酸的结合。
• 不推荐含有EDTA的胰酶去消化贴壁细胞，是因为它能够与Ca钙离子结合，从而影响AV与PS的结合。
• 如使用含EDTA的胰酶，需用PBS清洗，但在消化过程中仍会对细胞造成一定损伤，并且会降解Annexin V, FITC结合物，导致结果误差，因此尽可能使用不含有EDTA的胰酶消化样品细胞

   

2. 对实验数据的影响

• 样本：UM-SCC-12肿瘤细胞系
• 酶的选择4种：1× TrypLE , Accutase, 0.25% Trypsin，Accumax.
• 消化时间&温度：37°C for 5 min
• 实验：Annexin FITC+7-AAD双色凋亡染色

 

	(左) TrypLE and (右) Trypsin两种酶得到的凋亡实验结果
	1.细胞活力和凋亡比例的区别 2.TrypLE对应的样本，有较高的细胞活力 3.Acctuase对应的样本，有较高的凋亡比例

3.针对Accutase，你了解哪些？

    

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