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如何选择适合的多因子检测技术？

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如何选择适合的多因子检测技术？

135 人阅读发布时间：2025-09-23 14:05

选择适合的多因子检测技术，核心是围绕研究目标、样本特性、检测需求三大维度匹配技术特性，避免盲目追求 “高灵敏度” 或 “高通量”。

1、明确核心研究目标（优先级最高）

不同研究目标对 “检测维度”（如细胞水平 / 分子水平、功能 / 定量）的要求不同，直接决定技术方向：

核心研究目标	匹配技术类型	关键原因
检测单个细胞的因子分泌功能（如 T 细胞是否分泌 IFN-γ）	酶联免疫斑点技术（ELISPOT）	能定位 “单细胞分泌行为” 的技术，灵敏度达单细胞级，适合评估免疫细胞功能性
分析特定细胞亚群的因子表达（如 CD4+T 细胞同时分泌 IL-4/IFN-γ）	流式细胞术（多因子检测模块）	可同步结合 “细胞表面标志物” 与 “细胞内因子”，实现 “细胞分型 + 因子表达” 双重分析
对液体样本（血清 / 细胞上清）进行 10-50 种因子精准定量（需兼顾灵敏度与性价比）	Luminex 液相芯片 / 多重酶联免疫吸附试验（Multiplex ELISA）	均基于 “编码微球” 技术，样本用量极少（25-50μL），Luminex 适配更多定制化面板
检测低丰度 / 微量样本中的因子（如脑脊液、穿刺样本中的细胞因子）	MSD 超敏电化学发光技术	基于电化学发光信号放大，灵敏度达 fg/mL 级（远高于传统 ELISA），背景信号低，适合珍贵 / 低丰度样本检测
大规模筛选差异因子（如发现疾病相关新标志物，需检测 50-1000 种）	抗体芯片技术 / Olink 高通量蛋白组技术	抗体芯片一次检测几十种因子，适合广覆盖筛选；Olink 聚焦 “靶向蛋白组”，可检测 1536 种高价值因子（如炎症、肿瘤通路相关），数据重复性更优，适合精准标志物发现
检测未知因子或无抗体的因子（如新型细胞因子、翻译后修饰蛋白）	液相色谱 - 质谱联用技术（LC-MS/MS）	无需依赖抗体，基于分子量精准识别，适合 “非靶向检测” 或抗体难以制备的分子

2、结合样本特性筛选（排除不适用技术）

样本的类型、量、稀有度是技术选择的 “硬性限制条件”，需优先排除无法适配的技术：

（1）样本类型

若为组织样本（需原位分析）：优先考虑 “原位蛋白芯片”，排除需解离细胞的流式细胞术、依赖液体样本的 Luminex、MSD、Multiplex ELISA；
若为微量 / 低丰度样本（如脑脊液、单细胞悬液、穿刺样本）：优先 MSD（超敏 + 微量样本适配）、ELISPOT（单细胞级检测，不浪费样本），避免需大量样本的 LC-MS/MS（样本处理损耗大）、普通蛋白芯片（灵敏度不足）。

（2）样本量

样本极少量（如 < 20μL 血清、单细胞悬液）：选择 MSD（最低仅需 5-10μL）、Luminex（25μL 左右）；
样本充足（如大量培养细胞上清）：可灵活选择 Olink、蛋白芯片、LC-MS/MS 等对样本量要求稍高的技术。

（3）样本稀有度 / 珍贵性

若为珍贵样本（如患者肿瘤浸润免疫细胞、罕见疾病样本）：优先选择 “一次检测多指标 + 低样本消耗” 的技术（如 MSD、Luminex、Olink），避免分多次检测浪费样本；同时排除样本损耗大的 LC-MS/MS。

3、明确检测需求细节（精准匹配技术参数）

在锁定技术方向后，需通过具体检测需求筛选 “最优技术”，核心参数包括：

检测需求细节	关键技术参数考量	示例场景
检测灵敏度（是否需检测低丰度因子）	优先级：MSD（fg/mL 级）> Luminex/ELISPOT（pg/mL 级）> Olink / 抗体芯片 > Multiplex ELISA > LC-MS/MS	检测脑脊液中低丰度神经因子（如 BDNF，浓度常 < 1pg/mL），优先选择 MSD，排除灵敏度不足的 Multiplex ELISA
通量要求（一次需检测多少指标）	需检测 > 100 种→Olink（最高 1536 种）/ 抗体芯片； 20-100 种→Luminex（支持定制化面板）； <20 种→MSD/Multiplex ELISA/ELISPOT	需覆盖 “炎症 + 肿瘤血管生成” 双通路（共 60 种因子），选择 Luminex 定制面板；需检测 1000 种全通路因子，选择 Olink 或抗体芯片
结果重复性与数据可靠性	Olink（采用 “邻位延伸分析”，CV 值 < 10%）> MSD（电化学发光信号稳定）> Luminex > 抗体芯片 > LC-MS/MS	临床样本多中心验证（需严格数据重复性），优先 Olink 或 MSD
结果时效性（是否需快速出结果）	流式细胞术（1-2 天）、MSD/Luminex/抗体芯片（2-3 天）较快；Olink（3-5 天）、LC-MS/MS（5-10 天）较慢	临床应急检测（如区分细菌 / 病毒感染，需检测 IL-6、TNF-α、IFN-γ），优先选择 MSD 或 Luminex
成本预算	成本从低到高：ELISPOT < Multiplex ELISA < Luminex < MSD < Olink < LC-MS/MS	预算有限的常规定量研究（如检测 5 种核心细胞因子），优先 Multiplex ELISA；经费充足的精准标志物筛选，选择 Olink 或 MSD
是否需 “靶向性” 检测（是否聚焦特定通路 / 疾病相关因子）	Olink（预设 “炎症”“肿瘤”“神经” 等靶向面板，因子经过文献验证）> Luminex（支持按通路定制）> 抗体芯片（多为广谱筛选）	研究结直肠癌免疫微环境，需聚焦 “PD-1/PD-L1 通路 + 趋化因子”（共 30 种），选择 Olink 预设免疫面板或 Luminex 定制面板

4、总结：快速决策流程图

明确目标：是 “单细胞功能”→ELISPOT；“细胞分型 + 因子”→流式；“低丰度 / 微量样本定量”→MSD；“20-100 种定制化定量”→Luminex；“>100 种靶向筛选”→Olink；“广谱筛选”→抗体芯片；“未知因子”→LC-MS/MS；
核对样本：排除样本类型 / 量不匹配的技术（如微量样本排除 LC-MS/MS，组织样本排除液体检测技术）；
确认细节：按灵敏度、通量、重复性、成本调整（如临床验证选 Olink/MSD，低预算选 Multiplex ELISA）。

乐备实是国内专注于提供高质量蛋白检测以及组学分析服务的实验服务专家，自2018年成立以来，乐备实不断寻求突破，公司的服务技术平台已扩展到单细胞测序、空间多组学、流式检测、超敏电化学发光、Luminex多因子检测、抗体芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、PLA蛋白互作、多色免疫组化、DSP空间多组学等30多个，建立起了一套涵盖基因、蛋白、细胞以及组织水平实验的完整检测体系。

我们可提供从样本运输、储存管理、样本制备、样本检测到检测数据分析的全流程服务。凭借严格的实验室管理流程、标准化实验室操作、原始数据储存体系以及实验项目管理系统，已经为超过3000家客户单位提供服务，年检测样本超过100万，受到了广大客户的信任与支持。

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