LabEx 流式服务实例分享——小鼠脾脏的9色分析

本周分享的是LabEx采用BD Celesta（3激光12色）对小鼠脾脏进行初始和效应T细胞以及Th17细胞和调节性T细胞（Tregs）9色分析实例。

    

整个panel全部为包括表面marker和核内转录因子，抗体使用量按照厂商推荐。

    

样本类型：小鼠（脾脏）

仪器：BD Celesta

  

实验Panel：

     

实验设置：

   

类型	管数	作用
Blank	1	调节电压，确认阴性细胞群位置
单阳管	9	调节补偿
样本管	1	正式样本管

   

实验步骤：

1、小鼠脾脏研磨成单细胞悬液，过70um滤网，预冷1*PBS清洗

2、Ficol提取PBMC（若有红细胞，可再进行裂红处理），细胞计数（1.0x106个/ml）

3、24孔板种板，每孔1ml

4、细胞刺激：

4.1、每孔加入2ul刺激阻断剂；

4.2、37℃、5％CO2下孵育4-6小时；

4.3、孵育结束后吸取培养液至新的EP管中，300g离心5min；

4.4、弃上清，用1ml PBS重悬细胞沉淀，300g离心5min；

4.5、弃上清，用剩余液体重悬，用于后续实验操作；

5、细胞染色：

按照Live/Dead、FcR阻断剂、表面、破膜、胞内核内的顺序进行染色

   

实验结果

   

实验试剂

   

货号	名称	品牌
560401	Alexa Fluor® 647 Rat anti-Mouse Foxp3	BD Pharmingen
563061	BD Horizon™ BV605 Rat Anti-Mouse CD25	BD Pharmingen
553134	PE Rat Anti-Mouse CD44	BD Pharmingen
557659	APC-Cy™7 Rat Anti-Mouse CD45	BD Pharmingen
553061	FITC Hamster Anti-Mouse CD3e	BD Pharmingen
564171	BV786 Rat Anti-Mouse IL-17A	BD Pharmingen
550954	PerCP-Cy™5.5 Rat Anti-Mouse CD4	BD Pharmingen
564406	Fixable Viability Stain 510	BD Pharmingen
562574	Transcription Factor Buffer Set	BD Pharmingen
554714	Fixation/Permeablization Kit	BD Pharmingen
abs9101	1*红细胞裂解液	Absin
abs7008	70um细胞过滤器	Absin
abs9484	RPMI-1640培养基	Absin
abs972	胎牛血清（优级）	Absin
abs962	1*PBS	Absin

   

LabEx，让服务加速实验！！！

   

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基因水平：PCR Array、RT-PCR、PCR、单细胞测序
蛋白水平：MSD、Luminex、CBA、Antibody Array、ELISA、Sengenics、Elispot、IsoPlexis、Olink
细胞水平：细胞染色、细胞分选、细胞培养、细胞功能
组织水平：多重荧光免疫组化、免疫组化、免疫荧光
数据分析：流式数据分析、组化数据分析、多因子数据分析
联系电话：4001619919
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