LabEx 流式服务实例分享——小鼠PBMC的7色分析

本周分享的是LabEx采用BD Celesta（3激光12色）进行小鼠PBMC胞及Th1,Th2，Th17 七色分析实例。

    

整个panel全部为包括表面marker和核内转录因子，抗体使用量按照厂商推荐。

    

样本类型：小鼠肿瘤

仪器：BD Celesta

实验Panel：

   

     

实验设置：

   

类型	管数	作用
Blank	1	调节电压，确认阴性细胞群位置
单阳管	8	调节补偿
样本管	1	正式样本管

   

实验步骤：

1、PBMC细胞计数（1.0x106/ml）

2、24孔板种板，每孔1ml

3、细胞刺激：

3.1、每孔加入2ul刺激阻断剂；

3.2、37℃、5％CO2下孵育4-6小时；

3.3、孵育结束后吸取培养液至新的EP管中，300g离心5min；

3.4、弃上清，用1ml PBS重悬细胞沉淀，300g离心5min；

3.5、弃上清，用剩余液体重悬，用于后续实验操作；

4、细胞染色：

按照Live/Dead、FcR阻断剂、表面、破膜、胞内核内的顺序进行染色。

   

实验结果

   

实验试剂

   

货号	名称	品牌
557659	Ms CD45 APC-Cy7 30-F11	BD Pharmingen
557984	Ms CD3e Alexa 700 500A2	BD Pharmingen
553046	Ms CD4 FITC RM4-5	BD Pharmingen
551162	Ms CD8a PerCP-Cy5.5 53-6.7	BD Pharmingen
563854	Ms IFN-Gma BV650 XMG1.2	BD Pharmingen
560699	Ms IL-4 PE-Cy7 11B11	BD Pharmingen
559502	Ms IL-17A PE TC11-18H10	BD Pharmingen
564406	Fixable Viability Stain 510	BD Pharmingen
abs9101	1*红细胞裂解液	Absin
abs7008	70um细胞过滤器	Absin
abs9484	RPMI-1640培养基	Absin
abs972	胎牛血清（优级）	Absin
abs962	1*PBS	Absin

   

LabEx，让服务加速实验！！！

   

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基因水平：PCR Array、RT-PCR、PCR、单细胞测序 
蛋白水平：MSD、Luminex、CBA、Antibody Array、ELISA、Sengenics、Elispot、IsoPlexis、Olink 
细胞水平：细胞染色、细胞分选、细胞培养、细胞功能 
组织水平：多重荧光免疫组化、免疫组化、免疫荧光 
数据分析：流式数据分析、组化数据分析、多因子数据分析
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