嘿！关于PLA的FAQ来喽~

想要一张高分辨率的蛋白互作定位图？

      

想揭示组织、细胞中“谁在和谁说悄悄话”？

  
PLA技术（Proximity Ligation Assay）正是你寻找的答案！

     

上期我们整理了一份「PLA样本准备全流程指南」让您一次上手不踩坑！
这期呢，我们将PLA实验中应注意的事项整理成了FAQ，趁热打铁与您分享！

    

1、可以使用塑料玻片吗？

答：可以。

    

2、如何选择固定方法？

答：使用一抗获得的染色质量取决于所采用的固定剂类型。理想的固定剂需满足以下条件：

（1）维持细胞和组织形态：通过交联作用稳定结构；

（2）快速终止降解过程（如自溶）：抑制内源性酶活性以保护抗原完整性。若抗体说明书未指定特定固定方法，则需根据一抗特性、检测对象（细胞/组织类型）及目标蛋白性质优化固定方案。

我们LabEx所使用的PLA技术与所有常规IHC/IF固定剂兼容，例如：乙醇、丙酮、锌、多聚甲醛（注意：每次测定必须测定PFA浓度）、福尔马林（10% 缓冲甲醛）

   

3、LabEx可以接哪些样本种属？

答：人、小鼠样本。

    

4、 如何选择一抗抗体？

答：一抗需为 IgG 类抗体，且特异性识别目标蛋白，建议选择亲和纯化抗体，可选用多克隆抗体或单克隆抗体。

抗体种类：需要 1 种小鼠抗体和 1 种兔抗体；或者1种兔抗体和1种山羊抗体。

    

5、预实验必做吗？需要几张片子？

答：（1）建议做，摸索抗体浓度；如果很明确稀释倍数，可以不做； （2）一般1个指标如果要摸索，最少准备2-3张片子；2个指标需要的预实验片子数就需要4-6张片子。

    

6、为什么爬片的里面孔板需要位移标记？

答：怕运输过程中的颠簸，爬片易位，建议画个大概的范围。

    

7、固定后PBS需要灌满孔嘛？

答：固定后的爬片PBS洗2-3次，洗完保存在PBS中，PBS需要PBS要填满孔板，包裹好，不要漏液。注意样本运输的时候防震，建议在盒子上面写上正面朝上。

    

8、交付结果有几个视野？

答：交付时会交付整体扫描的图及阅图器软件，局部的根据自己目的任意调节和截多少个视野，截完有自带标尺，也比较灵活。

     

这次分享到这里就结束了，欢迎老师们来询~

     

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乐备实是国内专注于提供高质量蛋白检测以及组学分析服务的实验服务专家，自2018年成立以来，乐备实不断寻求突破，公司的服务技术平台已扩展到单细胞测序、空间多组学、流式检测、超敏电化学发光、Luminex多因子检测、抗体芯片、PCR Array、ELISA、Elispot、多色免疫组化等30多个，建立起了一套涵盖基因、蛋白、细胞以及组织水平实验的完整检测体系。

我们可提供从样本运输、储存管理、样本制备、样本检测到检测数据分析的全流程服务。凭借严格的实验室管理流程、标准化实验室操作、原始数据储存体系以及实验项目管理系统，已经为超过3000家客户单位提供服务，年检测样本超过100万，受到了广大客户的信任与支持。

 

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